Dados do Trabalho

Título

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇAO DE PAINEL MOLECULAR PARA O DIAGNOSTICO ETIOLOGICO ESPECIFICO DE UVEITES INFECCIOSAS

Objetivo

Uveítes infecciosas podem ser causadas por distintos patógenos, sendo comum a dificuldade do diagnóstico etiológico específico baseado apenas em critérios clínicos. Assim, ferramentas laboratoriais que subsidiem o diagnóstico específico dessas uveítes são desejáveis e tem grande potencial de aplicabilidade clínica. Objetivou-se, então, o desenvolvimento de um painel molecular multiplex capaz de detectar em fluidos oculares o DNA dos microrganismos mais implicados nessas uveítes.

Método

Para tal, um painel previamente validado para a análise de líquor, capaz de detectar os vírus herpes simples dos tipos 1 e 2 (HSV-1 e HSV-2), citomegalovírus (CMV), varicella-zóster (VZV) e Epstein-barr (EBV) foi avaliado utilizando amostras de humor aquoso. Concomitantemente, também foi avaliado kit comercial de PCR para detecção do DNA de Toxoplasma gondii (TOXO), fazendo a verificação da sensibilidade dos testes nesse tipo de material biológico. Em parceria com o Setor de Uveítes do Hospital São Geraldo/HC-UFMG, 35 amostras de humor aquoso de pacientes com uveíte supostamente infecciosa foram testadas. Foram avaliados efeito matriz, sensibilidade e correspondência entre o resultado do teste molecular e a hipótese clínica final, após tratamento e acompanhamento dos pacientes.

Resultados

Utilizando pool de amostras negativas artificialmente contaminadas com controles positivos exógenos contendo a sequência alvo, a validação analítica indicou a ausência de efeito matriz significativo (p=0,623) ao comparar o desempenho dos testes desenvolvidos em líquor com os testes em humor aquoso, definindo como satisfatória a sensibilidade da análise de todos os patógenos avaliados nesse material. Das 35 amostras testadas, 18 amostras (51%) tiveram resultado positivo para ao menos um dos alvos pesquisados: 8 para CMV (23%), 6 para TOXO (17%), 4 para HSV-2 (11%), 2 para EBV (6%) e 1 para VZV (3%), com disponibilização do resultado em menos de 24 horas (6,7 horas em média). Dessas, 2 amostras (6%) apresentaram resultado positivo para mais de um alvo. A análise de correspondência entre o resultado do teste e a condição clínica indicou taxa de concordância de 91,7% (33/36), demonstrando coerência dos resultados moleculares com as características clínicas e com a resposta terapêutica.

Conclusões

Como conclusão a ferramenta diagnóstica desenvolvida mostrou resultados consistentes e rápidos, devendo ser disponibilizada para uso na rotina dos oftalmologistas, apoiando-os na tomada de decisão em casos de uveíte infecciosa.

Palavras Chave

uveítes, uveítes infecciosas, uveítes virais, toxoplasmose, humor aquoso, PCR, diagnóstico etiológico, diagnóstico molecular, biologia molecular, painel molecular